河南美凱生物科技有限公司
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1、目的：
對微生物標準菌株的驗收、復活、確認、轉代、儲存、使用、廢棄等進行規定，確保標準菌株符合要求，保證檢測結果。
2、職責：
2.1、檢測中心主任負責標準菌株資源的配備。
2.2、微生物檢測室工作人員負責標準菌株的有效儲存和正確的使用。
3、要求：
3.1、供應商的選擇：選擇有資質的標準菌株的合格供應商，每批標準菌株必須有附件的供應商的合格證或檢測報告，來證明所采購的標準菌株是合格的。
3.2、標準菌株和驗收
菌株一到實驗室，一定要記錄好菌株號和標準菌株來源，確保溯源性清楚。同時，還應盡可能多的菌株信息，如：標準菌株名稱和數量、生產日期、接收日期和有無破損等。
3.3、凍干標準菌株的復活：
3.3.1、開啟產品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開產品外包裝，撕掉標簽上的拉片，將其貼于菌株保藏管上。
3.3.2、復活：選擇合適的培養基和培養條件（根據生產商說明）進行復活。凍干菌株的傳代次數不得超過5代，從標準菌株保藏中心購買的凍干標準菌株為第F0代。捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過擠捏壓碎小球使其與液體混合，立馬上拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉拭子，接種于初級培養平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無菌接種環在先前接種區域劃線10~20次，促使分離出單菌落。同時吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管馬上 進行培養。細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍干菌株會在幾天后長出，但是少數菌會表現出延滯期延長的現象，需要將正常培養時間加倍。復活后的菌株為F1代。
3.3.3、將TSB生長的濃菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混勻后將液體吸出，將保藏管-18℃保存1~3年為標準儲備菌株F2代。將平板上生長的良好菌株接種于營養瓊脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化鈉營養瓊脂）36℃培養24h當作工作菌株，為W3代，記錄為F2代。
3.3.4、工作菌株確認方法及依據：
大腸桿菌的確認依照“SN 0169-1992出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法”執行。
金黃色葡萄球菌的確認依照“SN/T 0172-2010進出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法”執行。
沙門氏菌的確認依照“SN 0170-1992出口食品沙門氏菌屬（包括亞利桑那菌）檢驗方法”執行。
副溶血性弧菌的確認依照“SN/T 0173-2010進出口食品中副溶血性弧菌檢驗方法”執行。
3.4、工作菌株的儲存：
3.4.1、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、儲存在2℃~8℃的冰箱內。
3.4.2、副溶血性弧菌在常溫條件下保存。
3.4.3、儲存期限：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌為3個月。
3.5、標準菌株的轉接：
3.5.1、標準菌株的復蘇：
① 菌種操作應在無菌條件下進行，防止雜菌污染。
② 每次使用和復蘇時只需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養。
3.5.2、標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。
3.5.3、工作菌株轉接的方法：
① 配制營養瓊脂培養基（副溶血性弧菌加3%氯化鈉）并分裝在試管內，121℃高壓滅菌15分鐘后擺斜面，冷卻后備用。
② 在無菌條件下，用接種環挑取菌苔至新奇斜面上作“之”字形劃線接種，放置在36℃的培養箱內培養24小時。
3.6、工作菌株的使用：
3.6.1、內部質量操縱 ：一個月一次陽性對比 、培養基每批驗收；
3.6.2、外部質量操縱 ：能力驗證、實驗室比對。
3.7、工作菌株的期間核查：
3.7.1、期間核查的頻率：每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。
3.7.2、工作菌株期間核查的方法及依據：同工作菌株的確認。
3.7.3、建立標準菌株期間核查記錄。
3.8、標準菌株的廢棄：
3.8.1、標準菌株如已老化、退化、或變異、污染等，經確認試驗不符合的或該菌種已無使用需要的應及時銷毀。
3.8.2、廢棄的標準菌株由部門負責人批準，使用人員放入高壓鍋內121℃30min高壓滅菌后作為廢棄物處理。
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